Simultaneous Determination of Methylparaben, Propylparaben, Phenoxyethanol and Chlorphenesin by High Performance Liquid Chromatography

Abstract

บทคัดย่อ วัตถุประสงค์: พัฒนาและตรวจสอบความถูกต้องของวิธีวิเคราะห์ปริมาณสารกันบูด 4 ชนิด คือ เมทิลพาราเบน (methylparaben; MP) โพรพิลพาราเบน (propyl-paraben; PP) พีน็อกซี่เอทานอล (phenoxyethanol; PE) และคลอร์เฟเนซิน (chlorphenesin; CH) ด้วยวิธีโครมาโทกราฟีเหลวสมรรถนะสูง (high performance liquid chromatography; HPLC) วิธีการศึกษา: ศึกษาและปรับเปลี่ยนสภาวะของ HPLC  ให้สามารถวิเคราะห์หาปริมาณสารกันบูด 4 ชนิด ในเครื่องสำอาง และตรวจสอบความถูกต้องของวิธีวิเคราะห์ ผลการศึกษา: สภาวะการวิเคราะห์ด้วย HPLC คือ คอลัมน์ C18 (250 mm×4.6 mm, 5 µm) ใช้ อาซีโตไนไตรล์ และกรดฟอสฟอริกความเข้มข้น 0.1 % v/v เป็นเฟสเคลื่อนที่พร้อมกับมีการปรับอัตราส่วน อัตราไหลของเฟสเคลื่อนที่ คือ 1.5 mL/min. ปริมาณการฉีดเป็น 10 µL ใช้ความยาวคลื่น 270 nm พบ retention time ของ PE คือ 6.8 นาที MP คือ 8.1 นาที CH คือ 10.3 นาที และ PP คือ 14.5 นาที ใช้เวลาวิเคราะห์ 30 นาที พบความสัมพันธ์เชิงเส้นตรงระหว่างพื้นที่ใต้กราฟและความเข้มข้นของสารละลายมาตรฐาน (R2 > 0.997) ซึ่ง MP, PP, PE และ CH อยู่ในช่วงความเข้มข้น 60 - 300, 12 - 60, 200 - 1000 และ 96 - 480 µg/mL ตามลำดับ ความเข้มข้นต่ำสุดของสารที่ทดสอบซึ่งเป็นที่ยอมรับได้ (LOQ) ของ MP, PP, PE และ CH 19.29, 1.50, 66.30 µg/mL และ 22.88 µg/mL ตามลำดับ ความถูกต้องของวิธีมีร้อยละการคืนกลับอยู่ในช่วง 96.10 – 102.35% ผลความแม่นยำมีค่าร้อยละส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์ต่ำกว่า 2.0% และปริมาณสาร MP, PP, PE และ CH ในเครื่องสำอางตัวอย่างอยู่ในช่วงที่กระทรวงสาธารณสุขกำหนด สรุป: วิธีโครมาโทกราฟีเหลวสมรรถนะสูงที่พัฒนาและผ่านการตรวจสอบความถูกต้องสามารถใช้ในการวิเคราะห์ปริมาณเมทิลพาราเบน โพรพิลพาราเบน พีน็อกซี่เอทานอล คลอร์เฟเนซิน ในเครื่องสำอางได้อย่างมีประสิทธิภาพ คำสำคัญ: โครมาโทกราฟีเหลวสมรรถนะสูง, เมทิลพาราเบน, โพรพิลพาราเบน, พีน็อกซี่เอทานอล, คลอร์เฟเนซิน, เครื่องสำอางAbstract Objective: To develop and validate novel methods for a simultaneous determination of preservatives including methylparaben (MP), propylparaben (PP), phenoxyethanol (PE) and chlorphenesin (CH) by high performance liquid chromatography (HPLC). Methods: Cosmetics products were subject to quantification of preservatives. The system configurations and conditions of the methods were optimized. Method validations were performed for all analytical methods. The method was applied for the quantitative analyses of MP, PP, PE, and CH in cosmetic products. Results: The HPLC system was developed by using C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 µm) and gradient elution with acetonitrile and 0.1% aqueous solution of phosphoric acid as a mobile phase at a flow rate of 1.5 mL/min, injection volume of 10 µl at ambient temperature and the UV detection at 270 nm. The retention time of PE, MP, CH and PP was 6.8, 8.1, 10.3, and 14.5 min, respectively with a total run time of 30 min. The linearity ranges of calibration curves were 60 – 300, 12 – 60, 200 – 1,000, and 96 - 480 µg/mL for MP, PP, PE and CH, respectively (R2 > 0.997). Limit of quantitation (LOQ) were 19.29, 1.50, 66.30, and 22.88 µg/mL for MP, PP, PE and CH, respectively. The accuracy of this method was determined by recovery studies and mean recoveries were 96.10 – 102.35% and the %RSD for the precision study were less than 2.0%. We found acceptable ranges of MP, PP, PE, and CH in cosmetic products as mandated by the Thai FDA regulation. Conclusion: HPLC was developed and validated. This method was successfully applied to determine MP, PP, PE, and CH in cosmetic products. Keywords: high performance liquid chromatography, methylparaben, propylparaben, phenoxyethanol, chlorphenesin, cosmetics